Oral chronic graft-versus-host disease: analysis of dendritic cells subpopulations

The graft-versus-host disease is the major cause of morbidity and mortality in patients who have undergone hematopoietic stem cell transplantation. Aiming at contributing to the understanding of the role of myeloid and plasmacytoid dendritic cells, and natural killer cells in chronic graft-versus-host disease, we examined biopsies of jugal mucosa of 26 patients with acute myeloid leukemia who had undergone allogenic hematopoietic stem cell transplantation. Half of these patients developed oral chronic graft-versus-host disease. Microscopic sections were immunohistochemically stained for anti-CD1a, anti-CD123 and anti-CD56. We calculated the number of immunostained cells in the corium per square millimeter and applied the Mann-Whitney test. Results showed a statistically significant increase of myeloid dendritic cells (CD1a+; p=0,02) and natural killer cells (CD56; p=0,04) in patients with oral chronic graft-versus-host disease. CD123 immunostaining showed no statistical difference between groups. It was concluded that myeloid dendritic cells and natural killer cells participate in the development of oral chronic graft-versus-host disease.

Resposta imune inata na estomatite protética: interação in vitro entre células epiteliais de palato humano e Candida albicans / Innate imune response in denture stomatitis: in vitro interaction between human palatal epithelial cells and Candida albicans

A presença de Candida albicans nos biofilmes microbianos da superfície interna das próteses totais superiores está relacionada com uma doença inflamatória no palato, a estomatite protética. Constituinte da defesa inata do hospedeiro, o epitélio bucal, por sua vez, tem a capacidade de reconhecer e reagir aos fatores fúngicos a fim de evitar a invasão pelo microrganismo. O objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro o efeito direto e indireto de C. albicans viável sobre as células epiteliais de palato humano (CEPH) ao longo do tempo. Objetivamos correlacionar os eventos de agressão, apoptose e invasão das CEPH provocados pelo fungo, com as respostas de defesa epitelial mediante produção de óxido nítrico (NO) e expressão gênica do peptídeo antimicrobiano β-defensina 2 (hBD-2). Material e Métodos: As CEPH foram obtidas, parte pelo método explante e parte pelo método enzimático, e mantidas em co-cultivo sobre uma camada de sustentação feederlayer (fibroblastos gengivais humanos mitoticamente inativados). Após desafios das CEPH com C. albicans ATCC 90028 por contato direto fungo-epitélio (D.D.) e indireto pelo sobrenadante da cultura do fungo hifal (D.I.), proporções de desafio de 0,01/1; 0,025/1 e 0,1/1 levedura/queratinócito (FUN/EPI) e tempos experimentais de 3, 6 e 10 h foram determinados; via ensaios de viabilidade celular por imunofluorescência (LIVE/DEAD), e análise qualitativa da invasão celular pelo fungo por meio do método colorimétrico com laranja de acridina. A apoptose epitelial foi determinada pela marcação nuclear fluorescente com Hoechtst 33258. A produção de óxido nítrico (NO) e a expressão de RNAm de hBD-2 foram avaliados por reação colorimétrica de Griess e RT-qPCR, respectivamente. Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão e submetidos aos testes estatísticos ANOVA Fatorial, Teste de Contraste; ou Teste de Mann-Whitney (p<0,05). Resultados: Em 3 h, foi detectado aumento da apoptose das células epiteliais em relação ao...

The presence of the fungus Candida albicans in the microbial biofilm underlying maxillary prosthesis is related to an inflammatory reaction of the palatal mucosa, the denture stomatitis. As a component of the host innate defense, the oral epithelium has the ability to recognize and react to fungal factors in order to prevent the microrganism invasion. The aim of this study was to in vitro evaluate the direct and indirect effect of viable C. albicans on the human palatal epithelial cells (HPEC) over time. The aggressive events, such as apoptosis and HPEC invasion by the fungus, were correlated with epithelial defense responses through the nitric oxide (NO) production and antimicrobial peptides β-defensin (hBD-2) mRNA expression. Methods: The HPEC were obtained by explant and enzymatic methods, and were maintained in co-culture on a feeder-layer support (mitotically inactivated human gingival fibroblasts). After the HPEC challenges with C. albicans ATCC 90028 by direct contact fungus-epithelium (D.D.) and indirect contact by supernatant from hyphal fungus (D.I.), defiance ratios of 0.01/1, 0.025/1 and 0.1/1 yeast/keratinocyte (FUN/EPI) and experimental times of 3, 6 and 10 h were determined. These conditions were standardized by cell viability immunofluorescence assay (LIVE/DEAD), and cell invasion qualitative analysis (colorimetric method with acridine orange). The apoptotic cells were determined by fluorescent nuclear staining with Hoechtst 33258. The nitric oxide (NO) production and hBD-2 gene expression were evaluated by Griess colorimetric reaction and RT-qPCR, respectively. The results were expressed as mean ± standard deviation and were analyzed using the factorial ANOVA, Contrast Test; or Mann-Whitney Test (p<0,05). Results: At 3 h, the apoptotic epithelial cells under 0.1/1 FUN/EPI increased compared to epithelium unchallenged (p<0,05) that remained over time with increasing concentration and independent of D.D. and D.I. The onset...

Vacinas anticárie - desafios / Anticaries vaccine - challenges

A análise do sistema imune de mucosas através da IgA secretória (IgAS) na saliva contra Streptococcus mutans (SM), principal agente etiológico da cárie dentária em humanos, representa uma importante ferramenta para a busca de uma vacina anticárie. Streptococcus mutans (SM) pode se estabelecer e se acumular no biofilme dentário devido à presença de diversos antígenos (Ags) de virulência associados às suas superfícies. As proteínas ligantes de glucano (Gbp), as glucosiltransferase (Gtf) e as adesinas (AgI/II representam os Ags mais estudados e a análise funcional destas proteínas é fundamental para a compreensão dos mecanismos moleculares de virulência de SM e consequentemente para o desenvolvimento de estratégias de controle de infecção por este microrganismo. A elaboração de vacina anticárie baseada nestes Ags de SM vem demonstrando ser uma forma eficaz de controle de SM, pois são capazes de estimular o sistema imune de mucosas a produzir anticorpos IgA contraestes Ags. Desta maneira, a busca de uma vacina anticárie representa um desafio promissor e alternativo para o controle da cárie dentária

O papel da imunofluorescência direta na fisiopatologia e no diagnóstico diferencial da estomatite aftóide recorrente / The role of immunoflorescence in the physiopathology and differential diagnosis of recurrent aphthous stomatitis

A estomatite aftóide recorrente é doença caracterizada por aparecimento periódico de aftas na mucosa oral, cuja etiologia e fisiopatologia não estão bem explicadas. Estudos recentes com imunofluorescência direta mostram resultados controversos. Alguns revelam que o distúrbio básico está relacionado à imunidade humoral, enquanto outros apontam alterações da imunidade celular. Formas atípicas de estomatite aftóide podem fazer diagnóstico diferencial com doenças vésico-bolhosas como pênfigo vulgar. OBJETIVO: Verificar a presença de imunecomplexos na mucosa de pacientes com estomatite aftóide e utilidade do método no diagnóstico diferencial com dermatopatias bolhosas. CASUÍSTICA E MÉTODO: 23 pacientes portadores de estomatite aftóide, de modo prospectivo, foram incluídos no estudo. Todos foram submetidos à biópsia de mucosa sob anestesia local para retirada de dois fragmentos. Um deles foi enviado para exame histológico e, outro, para ser realizada a imunofluorescência direta. RESULTADOS: As 23 amostras no exame histológico revelaram processo inflamatório inespecífico ulcerado. As amostras enviadas para imunofluorescência resultaram negativas e apenas uma revelou presença de complemento em membrana basal. CONCLUSÃO: Baseado em nossos resultados, concluímos que pacientes portadores de EAR não apresentam depósitos de imunecomplexos na mucosa da cavidade bucal e a imunofluorescência é útil no diagnóstico diferencial entre a doença e dermatopatias bolhosas.

Recurrent aphthous stomatitis (RAS) is a disease characterized by the periodic appearance of aphthous lesions on the oral mucosa, of which etiology and physiopathology are not well explained. Recent studies with direct immunofluorescence show controversial results. Some reveal that the basic disorder is associated with humoral immunity, while others point to changes in cellular immunity. Atypical forms of aphthous stomatitis may have its differential diagnosis carried out with vesicobullous diseases, such as pemphigus vulgaris. AIM: Check the presence of immunocomplexes in the mucosa of patients with aphthous stomatitis and the usefulness of the differential diagnosis method with bullous skin diseases. MATERIALS AND METHODS: 23 patients with aphthous stomatitis were prospectively included in the study. There were all submitted to mucosa biopsy under local anesthesia for the removal of two fragments. One of these was sent to histology and, the other to direct immunofluorescence. RESULTS: The 23 samples from the histology exam revealed an ulcerated inflammatory process. The samples referred to immunofluorescence resulted negative and only one showed the presence of complement in the basal membrane. CONCLUSION: Based on our results, we conclude that the patients with RAS do not show deposits of immunocomplexes in their oral cavity mucosa and immunofluorescence is useful in the differential diagnosis between this disease and bullous skin diseases.

Failure of nitric oxide production by macrophages and decrease in CD4+ T cells in oral paracoccidioidomycosis: possible mechanisms that permit local fungal multiplication

A paracoccidioidomicose é uma doença granulomatosa crônica que induz resposta inflamatória e imune específica. A participação do óxido nítrico (NO), produto da enzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS), como uma importante molécula fungicida contra o fungo Paracoccidioides brasiliensis tem sido demonstrada. Com o objetivo de melhor caracterizar as lesões orais da paracoccidioidomicose (OP), propusemos estudo imunohistoquímico das células iNOS+ e das células CD45RO+, CD3+, CD8+, CD20+, CD68+ e mastócitos. As amostras foram distribuídas em grupos de acordo com o número de fungos viáveis por mm2. Nossos resultados demonstraram leve imunomarcação para iNOS nas células gigantes multinucleadas (MNGC) e na maioria das células mononucleares (MN), e a proporção de células MN/MNGC iNOS+ na OP foi comparável a do grupo Controle (tecido bucal clinicamente saudável). Adicionalmente, nossa análise revelou similaridade no número de células CD4+ entre o Controle e o grupo de OP com elevado número de fungos. Estes achados sugerem que a baixa expressão de iNOS e a diminuição de células CD4+ na OP podem representar possíveis mecanismos que permitiram a multiplicação local do fungo e a manutenção das lesões bucais ativas.

Ambiente bucal: equilibrio vs. desequilibrio / Oral environment: balance vs. inbalance

Esta revisión se propone analizar el ambiente bucal considerando a los principales responsables de la homeostasis y del desbalance. Su abordaje prevé la investigación de los principales factores involucrados en el equilibrio-desequilibrio de los componentes del modelo epidemiológico: huésped, agente patógeno y sustrato. En condiciones de equilibrio se estudian ciertos aspectos del huésped: saliva, elementos dentarios, mucosa bucal y periodonto. Como resultado del interjuego de los protagonistas del modelo, se producen perturbaciones del ambiente cuya persistencia favorece la aparición de enfermedades bucodentales. El agente patógeno y el sustrato se analizan a partir del desequilibrio del medio; en el primero se considera la microflora que habita en condiciones normales y su transición a patógena, los factores que contribuyen en la adherencia y para el sustrato, la importancia de la dieta, consumo de azúcares, sustitutos, grasas, etc., en la dieta. Por último, se destacan las estrategias a seguir para revertir o impedir el desequilibrio, planteando el tratamiento de la caries dental y de la enfermedad periodontal desde el enfoque tradicional de la odontología y de los nuevos aportes, asociados algunos con la biología molecular (biomarcadores del FCG, aumento de la resistencia bacteriana, modelo del recrecimiento de la placa y de la glucólisis, etc.)

Immunological studies in oral submucous fibrosis.

Oral submucous fibrosis (OSMF) is a high risk precancerous condition. The possible role of immunological factors in the pathogenesis of this condition was evaluated in 113 cases and 25 controls. The male/female ratio was 1.5/1. The mean age of males was significantly lower than that of females. The mean ESR levels were within normal limits, but for a higher than 20 mm fall per hr. in 40% of the cases. The serum IgA, IgG, and IgM levels were elevated significantly as compared to the controls. Circulating auto-antibodies and tissue-deposited antibodies were also found in 33% and 40% of the cases, respectively. From the analysis of the results, it is difficult to ascribe an auto-immune basis for the causation of OSMF. The female bias and elder age group, the factors generally considered in favour of an immune disorder, was not found in our study. However, raised ESR in 40% and serum globulin levels in 47% of the patients, distinctly higher levels of serum immunoglobulins, and positivity for circulating and tissue deposited antibodies in 33% and 34% of the cases respectively, do indicate an immunological basis. Therefore, further studies are required to ascertain the role of cellular immune mechanism and genetic parameters to explain the etiopathogenesis of this complex clinical entity.